Evaluacion del funcionalismo oseo

Universidad de Oriente
Núcleo Bolívar
Escuela de Ciencias de la Salud “Francisco Battistini Casalta”
Laboratorio de Bioquímica Clínica.








Determinación de fósforo sérico









Bachiller: Angélica González
Profesor: Germán Guzmán



Cuidad Bolívar, junio del 2008



Índice

Introducción…02
Determinación de fósforo...03
Fundamento...03
Características del sistema...03
Reactivos...03
Precauciones y cuidados especiales…04
Material necesario…04
Influencia pre analítica...05
Muestra…05
Interferencia...05
Procedimiento…06
Calculo…06
Resultado…06
Bibliografía…07






Introducción

El fósforo es un componente normal del hueso y de todos los tejidos, se encuentra principalmente bajo la forma de ésteres orgánicos y en forma de folatos. El fósforo participa en los procesos metabólicos y es el responsable de la actividad de algunas enzimas, convirtiéndose en el elemento limitante de la actividad biológica.
Un aporte suficiente de fósforo en forma de fosfato es esencial para el buen funcionamiento del cuerpo humano ya que interviene en los procesos bioquímicos más elementales
Se usa para ayudar al diagnóstico y determinar la gravedad de patologias que afectan al tracto gastrointestinal e interfieren en la absorción de fósforo, calcio y magnesio. También es útil en el diagnóstico de alteraciones renales que interfieren con la excreción mineral. Los niveles de fósforo también se usan en la monitorización de pacientes con fallo renal

La cantidad total del fósforo sérico en un adulto normal es aproximadamente de 32mol (1 Kg), del cual el 85% se localiza en el hueso y el 15% en el plasma.
La mayor parte del fósforo plasmático en ayunas se encuentra en forma de ortofosfato inorgánico.

Los niveles totales de fósforo son mayores en los niños y tiende a aumentar en la mujer depuse de la menopausia, pero es mas bajo durante el periodo menstrual, dado que el fosfato es el principal anion intracelular. Se puede determinar su concentración tanto en suero como en orina. La concentración de fósforo sufre una variación circadiana, incluso durante el ayuno de 24horas, que dependen parcialmente de la corteza suprarrenal.

La concentración de fosfato aumenta con la ingesta de elevadas comidas ricas en este compuesto.


La determinación espectrofotométrica automatizada, es la más utilizada es la reacción del fósforo inorgánico con el molibdato amónico para formar fosfomolibdato, que se mide a 340 nm. La desventaja de este método es una interferencia importante en caso de hemólisis, ictericia y lipemia.

La muestra debe ser extraída en ayunas durante la mañana. Los niveles séricos de fosfato tienen variación diurna, siendo más elevados por la tarde y la noche, y se ven influidos por la ingesta y el ejercicio.

Determinación de fósforo

“Inserto de la casa comercial LABTEST Diagnostica”

Fundamento

Los iones de fosfato reaccionan con el molibdeno en un medio acido, formando un complejo amarillo, que por acción de un tampón alcalino (sustancias reductoras), es reducido y originan molibdenos de color azul, que es medido colorimétricamente

Características del sistema

El LABTEST desarrollo un método rápido y sencillo para determinación directa del fósforo inorgánico. La producción de un potente catalizador promueve la rápida catalizacion de la dosificaciones del reductor fue sustituido por Hidroxilamina, que no tiene los inconvenientes de estabilidad de otros reductores como el metol, acido ascórbico…
La interferencia de las proteínas es inhibida por la solubilizacion en medio alcalino, que también acelera la producción del color.
El método propuesto utiliza la técnica manual y es fácilmente aplicable a la mayoría de los analizadores semiautomáticos y automáticos capaces de pipetear dos reactivos y medir con exactitud una reaccion de punto y final.

Reactivos

-Catalizador: contiene polivinilpirrolidora y clorhidrato de hidroxilamina .Conservar entre 15 a 25ºC estables hasta la fecha de expiración impresa en el rotulo.
-Reactivos molibdatos: contiene mobibdato de amoniaco y acido úrico. Conservar entre 15 a 25ºC estables hasta la fecha de expiración impresa en el rotulo.
-Tampón: contiene carbonato de sodio e hidroxilo.
-Patrón 5,0mg/dl : después de la manipulación almacenar entre 2-8ºC, para evitar evaporación.

Precauciones y cuidados especiales

Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad y la manipulación de reactivos. Los reactivos de molibdato y el tampón son cáusticos y pueden producir quemaduras, se debe tomar cuidado para evitar la ingestión o contacto con piel y ojos. Se debe de lavar inmediatamente con abundante agua y consultar al medico.

El uso de detergente iónico para limpiar el material es otra fuente de contaminación con iones de fosfato

Material necesario

· Fotómetro: capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 640-700nm.
· Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados de muestra y reactivos.
· Cronometro

Influencia pre analítica

-Se aconseja recoger la muestra siempre en el mismo horario, debido a las variaciones circadianas del fósforo
-Considerar mujeres durante periodos menstruales y personas obesas, ya que se encuentran calores significativamente más bajos.

Muestra

Se puede usar:
-Suero
-Plasma heparinizado
-Orina
-Liquido amniótico.

La muestra debe ser extraída en ayunas durante la mañana. El suero o plasma deben ser separados hasta una hora después de la recogida de muestra para minimizar la liberación de fósforo de los hematíes. El analito es estable por dos días entre 15-25ºC y una semana de 2-8ºC .

Interferencia

-Valores de bilirrubina de hasta 5mg/dl
-Valores de triglicéridos de 170mg/dl o más.
-Muestras hemolizadas
-Plasma citratados, oxalatados, fluorurados o con EDTA, interfieren con la formación del complejo del fosfomolibdeno. Produciéndose resultados falsamente elevados o disminuidos.
La acción puede ser minimizada con el uso de blanco muestra, pero no es corregida para muestra hemolizada.

Procedimiento

Tomar 3 tubos de ensayos (identificados) y proceder:

1. Paciente (prueba): 1 ml de reactivo + 0.02ml de muestra
2. Patrón: 1 ml de reactivo + 0.02ml de muestra
3. Blanco: 1 ml de reactivo.

Mezclar bien. E Incubar 5 min. a temperatura ambiente
Leer a 340 nm. Determinar las absorbancia del patrón y del paciente, ajustando el cero con el blanco. El color es estable por 15 min

Cálculos

Fósforo (mg/dl) =Abs del Px/Abs del Patrón *5

Orina (mg/24hr)=mg/dl *vol 24hr(ml)/100

Las muestras de orina suelen diluirse 1:10 con solución salina normal antes de ser analizadas




Resultados

En el laboratorio de Bioquímica clínica, se utiliza el WIENER Metrolab 1600DR, el cual es un aparato semiautomático, cuyo resultados obtenido directamente expresado en mg/dl.

Paciente: Jelifer Garcia
Edad: 22 Años
Resultados obtenidos: 5.08 mg/dl
Valor Refencia: 2,5-4,8 mg/dl.

Los resultados obtenidos es de la paciente Jelifer García, cuyos valores obtenidos se encuentran un poco aumentados con respecto a los valores de referencia de este método, aunque este no esta aumentado de manera significativa. Y para otros V.R de 2.5-5mg/dl este se considera un valor de fósforo sérico normal
Causas de aumento del fósforo sérico: La hemólisis, el reposo prolongado, la menopausia, periodo menstrual y el ejercicio intenso elevan los niveles séricos de fosfato.

Bibliografía

-inserto de la casa comercial LABTEST Diagnostica. Fósforo
-Ángel, G. Ángel, M. Interpretación Clínica del Laboratorio. Transaminasas. Bogota – Colombia. 2006