domingo, 15 de junio de 2008

Analisis de semen




Universidad de Oriente
Núcleo Bolívar
Escuela de Ciencias de la Salud “Francisco Battistini Casalta”
Laboratorio de Bioquímica Clínica.













Análisis del semen
“Espermiograma”








Bachiller: Angélica González
Profesor: Germán Guzmán



Cuidad Bolívar, junio del 2008




Índice

Introducción...02
Espermograma…03
Casos en que se indica…03
Los marcadores evaluar la calidad del semen…04
Tipos de toma de muestra….04

Precauciones de la toma de muestra…..05

Condiciones para la realización de un espermograma...05

Transporte de la muestra...06

Recepción y conservación de la muestra en el laboratorio...06

Consideraciones de un semen normal…06

Partes de un espermograma….07

Nomenclatura de algunas variables del semen…09

Estudios del semen para diagnosticar problemas de fertilidad…09

Resultados…09

Bibliografía…10



Introducción



Para los hombres, el examen médico más importante que podría darles un resultado sumamente preciso acerca del estado de su salud reproductiva sería una prueba o análisis de su semen. Incluso en los casos en los que el problema no estuviera ocasionado por la calidad o por las características propias del semen; el hecho de saber qué hay de malo en él -un ejemplo podría ser que el mismo presentara baja motilidad o bajo conteo espermático-, ayudaría al especialista en fertilidad que lo estuviera atendiendo a saber qué clase de exámenes médicos más exhaustivos y precisos debería realizarle a fin de poder determinar la causa de su problemas.

Si luego de haber realizado esta prueba varias veces, la misma arrojara dos resultados que presentaran una concentración inferior a los 20 millones/mL, dichos resultados podrían estar sugiriendo la existencia de algún trastorno o problema de infertilidad. Es por ello que debería concertar una cita con un especialista en fertilidad para que el mismo -teniendo en cuenta su situación particular- pudiera someterlo a una serie de análisis más precisos.

El análisis de semen ha recibido distintos nombres como: espermograma, espermiograma, espermatograma, espermocitograma, espermocinetograma, cuyos términos varían según las publicaciones clínicas de cada país. Siendo espermiograma la terminología mas utilizadas
Siendo esta una prueba de tipo no hormonal, que evalúa el funcionamiento indirectamente de la próstata, vesícula seminal y glándulas accesorias como epidídimo, testículos.

Es necesario que los espermatozoides tengan una motilidad optima para que penetren en el moco cervical, y emigren para fertilizar el ovulo en las trompas de Falopio

En general la muestra es obtenida por masturbación, pero algunos centros han aprobado un condón especial para recolección del semen durante el acto sexual normal. Después de obtener la muestra, ésta debe ser llevada a la clínica lo antes posible.


No es frecuente que un paciente dado se presente un defecto único en todos los espermatozoides o en la mayoría de ellos, ya que en un mismo eyaculado se presenta una gran variabilidad y en muchos espermatozoides anormales se observan múltiples defectos


El análisis es realizado bajo examen visual directo y examen microscópico. Se estudia la calidad, cantidad, movimientos de los espermatozoides y otros factores.

Primero se valora la muestra para ver las características físicas del semen, la densidad de los espermatozoides, su motilidad y morfología (características celulares).




Análisis del semen
Espermograma


Se indica en casos



-Sospecha de esterilidad
-Verificar eficacia de la vasectomía
-Cuando se alega esterilidad para negar paternidad
-Casos de medicina legal



Los marcadores utilizados para evaluar la calidad del semen en el espermograma clásico, son fundamentalmente las siguientes

-Conteo de espermatozoides por mililitro (ml)
-Conteo total de espermatozoides
-Movilidad
-Viabilidad
-Morfología normal de los espermatozoides


Tipos de toma de muestra


-Coitus interruptus
-Masturbación
El tomar la muestra mediante el coitus interruptus tiene como desventaja la contaminación vaginal, y quizás una perdida de la totalidad de la muestra.
Si el hombre utiliza preservativo de látex con espermicidas este eliminara los espermatozoides y se obtendrá un volumen disminuido.
En el centro clínico debería existir un área privada y tranquila destinada para los pacientes que requieran la realización de este estudio.



Precauciones de la toma de muestra



-Utilizar un envase de plástico-estéril, al momento del paciente tomarse la muestra, debe frotar el envase con las manos, con la finalidad de que tenga este un temperatura parecida a la corporal, ya que un cambio brusco de temperatura disminuye la movilidad de los espermatozoides
-Si la muestra es recolectada por masturbación o cualquiera otra técnica se debe tratar de no tener perdida del material, y si esto ocurre reportar que hubo perdida.



Condiciones para la realización de un espermograma



-Tener entre 3 a 5 días de abstinencia sexual
-Tener abstinencia alcohólica
-No tener fiebre, gripe, ni ningún proceso viral o bacteriano
-Se debe realizar higiene de sus genitales con agua y jabón, y secarse bien con una toalla sin usar, antes de proceder a la obtención de la muestra.
-Tomarse la muestra por la técnica indicada
-Utilizar un envase de plástico-estéril
-Obtener la muestra completa, sin descartar ninguna porción con la técnica adecuada. Evitar que entre agua al envase de la muestra
-Entregar la muestra en el laboratorio en un no mayor a 1 hora después de haber sido tomada.
-Indicar si hubo pérdida de alguna fracción de la muestra. Recordar que la primera fracción es la más concentrada.



Transporte de la muestra



-Debe hacerse de manera inmediata, no más de media hora después de haber tomado la muestra

Recepción y conservación de la muestra en el laboratorio

-Rotular la muestra perfectamente
-Manejar la muestra con precaución, ya que se pudiera de muestras que tengan HIV, Hepatitis B, Virus herpes… y se puede transmitir a través de ella.
-Mantener a temperatura ambiente la muestra



Análisis del semen

Consta de 3 partes



-Examen físico o macroscopico comprende: aspecto, color, ph, filancia, medición del volumen seminal
-Examen microscopio comprende: motilidad, viabilidad, recuento total de espermatozoides
-Examen marcadores químico: para la función de la próstata, vesícula seminal, epidídimo.


Examen físico



-Aspecto: este va a depender si es antes o después de la licuefacción (es la disolución de los grumos o coágulos por acción enzimático, esta ocurre hasta los 30min después de haberse tomado la muestra). Debe ser completa dentro de los 60min
Antes de la licuefacción. El semen recién eyaculado
Aspecto del semen heterogéneo
Después de la licuefacción
Aspecto homogéneo- opalescente
La opalescencia es proporcional a la concentración de espermatozoides

-Color: va desde Blanco grisáceo a blanco amarillento. Esto va depender de la concentración de espermatozoides presentes.
Según el periodo de abstinencia del paciente, si es mas de un mes el color ligeramente acre, color pardo-marrón o si contiene hematíes (hematospermia). Esto se debe a la cantidad de Flavonoides
Además este puede variar si el paciente presenta en ese momento alguna inflamación, infección, u otro cuadro patológico

-ph: Se mide con papel de ph al colocar una gota de semen y al cabo de 30seg se compara el color con la cartilla de calibración para determinar el ph de la muestra el cual debe caer dentro del rango de referencia, el laboratorio debe usar un papel de un rango adecuado (6.4-8.0 6.1-10.0). El ph del semen varía normalmente de 7.2-8.
Debe ser medido dentro de los 60min después de la eyaculación.
Pocos son los trastornos capaces de alterarlo. Aunque un ph mayor de 10 puede considerarse signo de infección seminal saciado a otros síntomas, y un ph <7.2, se observa cuando existe un déficit de la función de las vesículas seminales (síndrome de ausencia funcional de los conductos eyaculadores)

-Filancia (viscosidad): esta se mide después de la licuefacción, y se puede realizar de dos maneras. 1. Aspirando la muestra con una pipeta y dejándola caer luego gota a gota. Normalmente las gotas formadas son bien definidas y pequeñas. 2. utilizando una varilla de vidrio en la muestra y observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. La longitud del filamento formado no debe exceder los 2cm No se conoce la causa por la cual algunos pacientes se observa una consistencia aumentada o la presencia de bridas mucosas. (Algunos autores sugieren que podría ser un signo de infecciones del aparato urogenital, prostatitis). El aumento de esta puede interferir en la medición de la concentración y la movilidad de los espermatozoides.


-Volumen seminal: se mide en recipientes graduados de base cónica como los tubos de centrifuga graduado o por aspiración completa de la muestra con una pipeta graduada. Se considera un volumen seminal normal de 2ml o más. Un volumen menor (hipospermia) <1.5ml>6ml puede ser signo de infección de las vías seminales (particularmente de las vesículas seminales). El volumen total de eyaculado se calcula con una operación aritmética de multiplicar la concentración de espermatozoides/ml por el volumen eyaculado. Se considera normal más de 40 millones de espermatozoides por eyaculado



Examen microscópico


-Motilidad de los espermatozoides: para una buena evaluación de la movilidad de los espermatozoides, se debe realizar antes de las dos primeras horas de haberse producid el eyaculado. Ya que a medida que pasa el tiempo se hallara un menor porcentaje de espermatozoides móviles.
La Organización Mundial de la Salud (OMS), recomienda un sistema simple de medir la movilidad, se clasifica en 4 categorías:
a. Movilidad progresiva rápida (%)
b. Movilidad progresiva lenta, lineal no (%)
c. Movilidad no progresiva (%)
d. Inmovilidad (espermatozoides inmóviles)

Se considera normal cuando: el 50% de los espermatozoides o mas presentan una movilidad progresiva rápida (categoría a+b), mas del 25% mas de los espermatozoides presentan movilidad progresiva rápida lineal (categoría a).

Se coloca una gota de la muestra de semen sobre una lámina portaobjeto (limpia, libre de grasa), y se cubre con una cubreobjeto. Se espera un tiempo de 1min antes de observarla al microscopio. Se observa con el objetivo de 40X. Luego se procede a contar los espermatozoides presentes hasta completar un total de 100espermatozoides por campo observado.
Una disminución de la movilidad (astenozoospermia) puede ser hallazgo de daño global de la espermatogenesis (este hallazgo puede ser aislado o acompañado de alteraciones en la concentración y morfología normal de los espermatozoides). El encontrar este hallazgo en un análisis seminal no es un marcador diagnostico y algunos casos tampoco de pronostico, por lo que se requiere la realización de otras pruebas complementarias para diagnosticar alguna alteración.

-Viabilidad de los espermatozoides: cuando en un espermograma se comprueba aumento del % de la disminución de la movilidad de los espermatozoides (astenozoospermia), es necesario medir la viabilidad de espermatozoides vivos, esto permite precisar si la baja movilidad se debe, a que existe un gran número de espermatozoides muertos.
Un hallazgo de astenozoospermia con un porcentaje normal de espermatozoides vivos sugiere la existencia de anomalías estructurales de la cola de los espermatozoides, cuyo diagnostico de certeza solo puede hacerse por microscopia electrónica. Lo que nos servirá como prueba pronostica de una patología. Como existe diferencias entre el valor normal de espermatozoides vivos en un espermograma dado por la OMS en sus diferentes ediciones, cada laboratorio debe establecer sus valores normales. Pero se considera como valor de referencia mayor del 75% de espermatozoides vivos.

Para diferenciar de los espermatozoides realmente muertos de los inmóviles vivos
Se someten los espermatozoides a alguna tinción supravital o se evalúa su capacidad osmorreguladora cuando se les expone a condiciones hipoosmóticas.

-Tinción supravital: se basan en el principio de que las células muertas cuyas membranas plasmáticas están dañadas, permiten la entrada del colorante. Existen dos de estos métodos: el uso de eosina sola en preparados frescos o una combinación de eosina y nigrosina en preparados secos. No es reversible

*Tinción con eosina 5%
1. Agregar una gota de semen fresco en un portaobjeto, con una gota de solución de eosina al 5% (mezclar), y cubrirse con un cubreobjeto.
2. Al cabo de 1 ò 2 minutos obsérvese el preparado con 40X con luz intensa.
3. Cuéntense los espermatozoides no teñidos (vivos) y los teñidos (muertos). Igualmente se debe contar 100 o mas espermatozoides.
Se reporta el porcentaje de espermatozoides vivos y muertos

*test hipoosmotico: evalúa la integridad anatomo-funcional de la membrana plasmática del espermatozoide, que de encontrarse intacta, incorpora agua del medio extracelular al colocar el espermatozoide en un medio hipoosmotico. Es reversible

Morfología de los espermatozoides: se han empleado muchas técnicas para el estudio de la morfología de los espermatozoides, las cuales utilizan en su mayoría extendidos teñidos con técnicas como giemsa, papanicolaou modificado para espermatozoides, la tinción de shorr, entre otras técnicas. Según la OMS se considera como valor de referencia un 30% o más de las formas normales de los espermatozoides.

Debido a que en muchos espermatozoides anormales se observan múltiples defectos, no hay un acuerdo sobre si el resultado de la morfología debe expresarse en forma global (total de espermatozoides normales y anormales) o si es mas conveniente especificar el % de ellos con anomalías de la cabeza (defecto de tamaño y/o forma), pieza intermedia (defecto de cuello) y en la cola.

La teratozoospermia puede observarse en un gran numero de trastornos como: varicocele, sepsis seminal, estresa y la exposición a agentes externos nocivos…
Para comprobar las anomalías existente en los espermatozoides de un paciente debe de existir alrededor del 95% de sus espermatozoides. Raras ocasiones se encuentran anomalías morfológicas que invariablemente den lugar a esterilidad, entre estas están: los espermatozoides de cabeza redonda, los de cabeza en forma de pera y los de cabeza en forma de alfiler.

Recuento de los espermatozoides: para realizar el recuento se utiliza la cámara de Neubauer, y se realiza en el cuadrante central del hematimetro, el mismo que es utilizado para contar plaquetas y hematíes. Se cuentan en ambos retículos y se calcula un promedio. La diferencia entre ambos recuentos debe ser menor al 10%.

El conteo total de espermatozoides suele reflejar el estado de la espermatogénesis. También muestra la relación directa con el volumen eyaculado y con el previo período de abstinencia sexual.

Según el grado de concentración observada, se prepara diluciones de la muestra. Las cuales pueden ser 1/10, 1/20, 1/50.
El diluyente a utilizar contiene NaHCO3, formalina al 35%(v/v) y agua destilada. Para determinar la concentración en millones/ml del semen, se divide el promedio del recuento por el factor de corrección que va a depender del tipo de dilución usada y del número de cuadrados que fueron contados.


Dilución (Semen + diluyente) -------------------- Numero de cuadrado contados
----------------------------------------------------- 25 -------10-------5
1+9-------------------------------------------------10--------4--------2
1+19------------------------------------------------5--------2----------1
1+49-----------------------------------------------2--------0.8------0.4

De MORTINER, 1985


Otras células en el semen

Leucocitos: se considera que un eyaculado normal debe haber menos de 1.000.000/ml. La presencia de cantidades mayores de leucocitos (leucocitospermia), se pudiera sospechar de una infecciones, pero la ausencia de ellos tampoco nos asegura que no existe una sepsis de las vías seminales. El número de células se calcula así= numero de células por contaje total de espermatozoides/100

Células epiteliales: principalmente de la uretra, células espermatogénicas inmaduras de distintos tipos. La concentración de células debe medirse y dar su resultado en porcentaje. Se considera normal que el semen eyaculado no contenga más del 5% de estas células. La presencia de células espermatogénicas inmaduras en el eyaculado es un signo de irritación del epitelio germinal si se producen eyaculaciones repetidas. Su presencia requiere de otras pruebas para dar un diagnostico



Consideraciones de un semen normal



-Mas de 20.000.000 de espermatozoides/ml
-Mas de 50% de los espermatozoides móviles (a+b), o mas del 25% categoría a
-Mas del 30% de los espermatozoides con forma y tamaño normal



Nomenclatura de algunas variables del semen



-Aspermia: ausencia de semen. No hay eyaculado
-Azoospermia: ausencia de espermatozoides en el eyaculado
-Astenozoospermia: Disminución de la movilidad de los espermatozoides. Menos del 50% de espermatozoides con progresión lineal(a+b), o menos del 25% con progresión lineal rápida(a)
-Hipospermia: Volúmen seminal menor de 2ml
-Hematospermia: color pardo de la muestra de semen
-Necrozoospermia: concentración, morfología de los espermatozoides normal y aumento de % de espermatozoides muertos.
-Oligoospermia: numero de espermatozoides inferior a 20 millones/ml
-Oligoastenoteratozoospermia: número de espermatozoides inferior a 20 millones/ml, disminución de la movilidad de los espermatozoides, aumento de formas anormales de los espermatozoides.
-Teratozoospermia: aumento de formas anormales de los espermatozoides (más de un 30% o menos de un 50% de formas anormales)
-leucocitospermia: presencia de 1.000.000 de leucocitos/ml
-Normozoospermia: eyaculado normal. Concentración de espermatozoides 20.000.000/ml



Estudios que se le hacen al semen con el propósito de diagnosticar a presencia de algún problema de fertilidad



-Espermatograma
-Espermocultivo
-Recuperación de espermatozoides motiles
-Prueba de viabilidad
-Prueba de integridad del acrosoma
-Determinación de anticuerpos antiespermaticos




Resultados




Análisis de semen
Paciente: Y. Escudero
Edad: 25 años

hora de toma de muestra= 9.55am

Examen físico:
-Aspecto= después de la licuefacción(25min) aspecto homogéneo
-Color= blanco amarillento
- Ph= 8
- Viscosidad= mas de 2cm
- Volumen seminal = 5ml
- Volumen minino de eyaculado= 62.000.000 de espermatozoides/ml


Examen microscópico
Motilidad= categoría a
Mas del 25% de los espermatozoides tienen movilidad progresiva rápida
Viabilidad= mas del 75% de los espermatozoides están vivos móviles
Morfología= mas del 30% de los espermatozoides de formas normales
Recuento Total de espermatozoides=
12 400.000espermatozoides/ml
Otras células:
-Leucocitos= 620.000 leucocitos/ml
Para el rexcuento de espermatozoides se realizo una dilucion 1/10


Bibliografía


- Guía de laboratorio de bioquímica clínica. Universidad de oriente, Núcleo Bolívar
-Ángel, G. Ángel, M. Interpretación Clínica del Laboratorio. Espermatograma. Bogota – Colombia. 2006